STUDY ON THE PROTEIN FRACTION OF DONKEY MILK

پروتئین WHEY الاغ و کل کازئین ها (کازئین های کامل)| از پنج حیوان با روش جداسازی ایزوالکتریک در pH=4.6 و در دمای ۲۲  درجه سانتی گراد به دست آمده است.

[ روند شیمیایی که مواد جامد از بخش مایع آن جدا می شود Precipiation]

هم چنین کازئین های الاغ با توجه به حساسیت آن ها به دما تبخیر و تفکیک شدند که نتیجه آنچه بود جداسازی سرد (CP) (در دمای ۴۶ درجه و pH=4.6) و جداسازی حرارتی (TP) (دمای ۳۰ درجه  و pH=4.6) نامیده شد. بخش های کازئین با روش کروماتوگرافی مایع با تفکیک پذیری و دقت بالا در ستون یا CELL تبادل آنیون با استفاده از فاز معکوس، آنالیز شد.

پروتئین های شیر الاغ با SDS و UREA-PAGE آنالیز شدند. این آنالیزها درصد کازئین های αs و شبه β را در بخش CP و کازئین های β  و شبه گاما را در بخش TP نشان داد. با استفاده از تجزیه و تحلیل تصویر نشان داده شده که میزان ۲۱.۰۳% از آب پروتئین را لیزوزیم تشکیل داده است.

INTRODUCTION:

ترکیبات در پروتئین، لاکتوز، چربی و مواد معدنی شیر الاغ و همچنین شیر مادیان در مقایسه با شیر گاوی بسیار شبیه تر به شیر انسان است. به ویژه، به نظر می رسد که ویژگی ها و خصوصیات پروتئین های شیر الاغ نتایج مثبتی در خصوص حساسیت های متعددی که کودکان و اطفال از آن رنج می برند، داشته است. جداسازی و مشخصات کازئین های αs_{۱ –}αs_{۲ –}  گاماγ انجام شد. علاوه بر این، مشخصات و هویت بخش های پروتئینی آغوز مادیان نیز گزارش شد. از طرفی دیگر اطلاعات درباره ی بخش های پروتئینی شیر الاغ بسیار محدود است. این مطالعه و تحقیق قصد دارد که اطلاعات عمیق تر و بیشتری از کازئین و بخش های آب پروتئین شیر الاغ ارائه دهد.

MATERIALS AND METHODS:

پنج الاغ شیرده با استفاده از دستگاه شیردوشی، سه بار در روز دوشیده شدند.

کازئین ها و پروتئین های آب پنیر از سیر پس چرخ (شیری که چربی آن توسط سانتریفیوژ کردن جدا شده باشد به کار می رود.) با استفاده از جداسازی ایزوالکتریک به دست آمده در (دمای ۲۲ درجه و PH=4.6). همچنین کازئین ها با توجه به جداسازی ایزوالکتریکی تفکیک شدند (pH=4.6) و با توجه به حساسیت آن ها به دما (۳۰ درجه و ۴ درجه) منجر به جداسازی سرد یا رسوب سرد (CP) و جداسازی حرارتی یا رسوب حرارتی شد (TP). سپس کازئین ها با استفاده از روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) در CELL یا ستون تبادل آنیون به دنبال فاز معکوس، آنالیز شدند. وزن مولکولی نشانگرها ۱۴.۴-۲۱.۵-۳۱-۴۲.۷-۶۶-۹۷.۴kDa  بود. تجزیه و تحلیل ژل ها با یک آنالیزور تصویر بر اساس نرم افزار Quantiscan انجام شد.

RESULTS AND DISCUSSION:

SDS-PAGE از شیر پس چرخ شده ی الاغ (شکل۱) الگویی شبیه به آنچه برای شیر مادیان گزارش شده بود نشان داد. در زیر پروتئین های آب پنیر بر اساس وزن مولکولی آن ها مشخص شده است:

لاتوفرین Lattoferrin= 75kDa و سرم آلبومین= ۶۷kDa، بتالاکتوگلوبولین=۱۹kDa، لیزوزیم=۱۷kDa، آلفالاتوگلوبولین=۱۲kDa.

درصد نسبی Whey پروتئین های ذکر شده در بالا به ترتیب: ۴.۴۸-۶.۱-۲۹.۸۵-۲۱.۰۳-۲۲.۵۶% بر اساس آنچه در مقاله Pagliarini و همکاران گزارش شده است دو باند با وزن مولکولی تقریبا ۱۰۷ و ۶۰ kDa (به ترتیب ۴.۶۸ و ۶.۸۱ از پروتئین آب پنیر) باید نشان دهنده ایمونوگلوبولین باشد.

جالب است بدانید که مشخصات الکتروفورزیک الاغ یک پروتئین اضافی در بخش آب پنیر خود با وزن مولکولی تقریبا ۲۳.۵ kDa نشان داد. (شکل۱، خط۱ یا راه ۱)

SDS-PAGE کازئین کامل (محدوده ای از تقریبا ۲۷ تا ۳۳ kDa کیلودالتون) نشان داد که بعد از سانتریفیوژ (pH=4.6 و ۴ درجه سانتی گراد) بیشتر کازئین ها در بخش جداسازی سرد یا CP بودند.

توضیحات شکل ۱: خط ۱ و ۸: شیر پس چرخ شده از حیوانات مختلف  ۲: محلول کامل بخش پروتئین آب پنیر در pH=4.6 و دمای ۲۲ درجه   ۳: کازئین کامل جداسازی شده در pH=4.6 و دمای ۲۲ درجه

۴: مولکول-وزن نشانگرها  ۵: نتیجه بخش پروتئین آب پنیر بعد از جداسازی CP و TP

۶: بخش TP (جداسازی حرارتی)  ۷: بخش CP (جداسازی سرد)

بخش CP جدا شده در Urea-Page قلیایی به سه گروه پروتئین شامل ۱،۲ و ۳ تقسیم شد (شکل ۲).

بعد از کروماتوگراقی تبادل آنیون به دنبال فاز معکوس، بخش CP کازئین به Subfraction (زیر مجموعه) CP-1 حاوی گروه ۱، CP-2 حاوی گروه های ۲ و ۳ جدا شد. در حالی که بخش TP به زیر مجموعه های TP-1، TP-2 و TP-3 جدا شد (شکل ۲).

با استفاده از SDS-PAGE، این گزینه اخیرا پیدا شده وزن مولکولی تقریبی ۱۵ کیلو دالتون داشت (نشان داده نشده است.) اگر چه در مطالعه و تخقیق حاضر نتایج ما با کازئین های گاوی و آنچه که در مقاله Uidder و همکاران گزارش شده است.

گروه ۱ (CP-1) به عنوان کازئین شبه بتا و گروه ۲ و ۳ (CP-2) به عنوان کازئین شبه آلفا شناسایی شد. پروتئین های در زیر مجموعه TP-3 به عنوان کازئین شبه گاما شناسایی شد و در حالی که پروتئین های در زیر مجموعه های TP-1 و TP-2 به عنوان کازئین های شبه بتا شناسایی شد. تجزیه و تحلیل بیشتری به منظور تایید شناسایی موجود از مجموعه های کازئین در شیر الاغ مورد نیاز است.